Diabetologia：启动时但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出新现人体内自身血清到出新现1标准型心血管疾病外科病因的的蓬勃发展率在青少年时代就有很好的描绘出，多个人体内自身血清阴性的青少年中所有70%在肝脏切换后10年末患上心血管疾病，而随访15年的青少年这一比重增大到84%。来得之下，占总外科1标准型心血管疾病一半以上的标准型1标准型心血管疾病的发病必要还没有人得到充分的研究工作。

越来越多的人开始用到依此系统来并不一定1标准型心血管疾病的的蓬勃发展：性状在出新现多种人体内自身血清时转回第1下一阶段，出新现食欲间歇性时转回第2下一阶段，出新现病因时转回第3下一阶段。一些多发人体内自身血清阴性的性状，在1期和2期，的蓬勃发展较比快速，并蓬勃发展为发病的1标准型心血管疾病。我们之后描绘出了一一组在首次扫描到多种人体内自身血清样品后至少10年无心血管疾病的想像中比快速的蓬勃发展者，这一组患儿人数少，但不同之处十分明确。随后，我们推断出人体内自身蛋白特异性CD8+T巨噬细胞反应以在的蓬勃发展加速的患儿中所基本不实际上，但在近期发病和长期以来实际上的心血管疾病患儿中所很容易扫描到。这也许说明了，与的蓬勃发展患儿来得，这些患儿自身病原体的调节增强。

早期研究工作说明了，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但心血管疾病患儿实际上一些功用缺陷，其中所包括对IL-2的反应以灵活着性降低。此外，心血管疾病患儿中所的现像CD4+T巨噬细胞也许对调节凸显抵抗性，发挥为现像T巨噬细胞的抑制作用减弱，自然导致的Treg和粘液导致的游离Treg，以及蛋白个人经历的CD4+T巨噬细胞中所IL-2反应以减弱。本研究工作的旨在是描绘出了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群想像中加速的蓬勃发展者中所的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁表列胃癌的患儿亲族中所检测1标准型心血管疾病的危险因素。我们之后描绘出了长期以来加速的蓬勃发展者的不同之处，他们维持多重人体内自身血清阴性超过10年，但没有人出新现心血管疾病的外科病因，比快速性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续维持无心血管疾病并愿意提供大量体内样品的加速的蓬勃发展者纳入T和B巨噬细胞功用比对。在目前的研究工作中所，8名比快速的蓬勃发展者(SP一组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的人体内自身血清阴性。所有的大多数人都西北面1标准型心血管疾病的蓬勃发展的1期，尽管一些人随后保住了人体内自身血清对某些蛋白的阴性反应以，然而，一名患儿已经西北面2期至少6年，但没有人出新现外科病因，一名患儿被诊断为心血管疾病，该受试者72岁，在收集实验样品时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中所对该酪氨酸顺利完成了单独评估。分离外周血单个氘巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞抑制作用试验中所评估酪氨酸中所Treg的频序、表观和功用。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重回)顺利完成无指导聚类比对，评估Treg表观。

结果：与健康酪氨酸来得，来自比快速的蓬勃发展体的知觉CD4+T巨噬细胞的指导聚类辨识，激活着的知觉CD4+ Treg频序增大，与一组胺游离的TNFR无关蛋白(GITR)强调增大有关。一名HbA1c急剧下降的患儿与的蓬勃发展加速者和最简单的对照一组来得，Treg序有所各不相同。功用比对说明了，与健康酪氨酸来得，来自加速的蓬勃发展体的Treg介导的CD4+现像T巨噬细胞抑制作用明显受到破坏。发挥为对现像CD4+T巨噬细胞CD25和CD134强调的抑制作用增大。

左图1 深入的表观比对辨识，CD4+Treg亚标准型在比快速的蓬勃发展队列中所增大。由FlowSOM生成的Treg楼内，汇聚在来自所有酪氨酸的活着CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示出物强调鉴定出新10个元簇:知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用到9个各不相同Treg标示出生成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个协同(100个协同)，大得多的元协同(10个元协同)在数据流一组一处上色。每个数据流中所的点心左图指出单个标示出的强调层次。(b)每个元聚类的热左图，以辨识整体标示出强调。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)生成左图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)来得较金属量为每个metacluster罐两条路线左图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP一组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T巨噬细胞(l)。红色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选大写字母秩检查。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用到CITRUS的预测模标准型证实，Treg频序的增大是的蓬勃发展加速的标志。AO奈斯(a - f)和柑橘比对(g-k)相当SP大多数人和最简单的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利完成分离，精心设计FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(白点)一组以及酪氨酸SP 606(红色)中所CD25+ cd127的频序概述左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯子集的罐两条路线左图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，标记突出新的簇被辨认为SP和HD队列彼此间的各不相同。(j)罐两条路线左图辨识了在SP(白点)和HD(灰点)一组中所，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的来得较金属量(比重)。(k)直方左图辨识每个簇的表观(黄色)和Treg标示出来得较强调与故事情节强调(金色);上列，缓存Treg_3;下面悄悄，缓存Treg_4。故事情节与所有其他簇中所标示出的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选大写字母秩检查

左图3 与健康献血者来得，的蓬勃发展加速者知觉treg的GITR增大。每个知觉CD4+T巨噬细胞元簇(知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个强调标示出的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热左图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR强调串接，辨识直方左图(c)和概述左图(d)。Wilcoxon筛选大写字母秩和检查，p< 0.07(红色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(金色)酪氨酸SP 606和最简单的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR强调，从AO奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(红色)串接，辨识直方左图(e)和概述左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选大写字母秩检查

左图4 来自加速的蓬勃发展的CD4+ treg巨噬细胞支配现像CD4+T巨噬细胞的灵活着性降低。SP一组用金色的两条路线和边框指出，HD一组用黑色的两条路线和边框指出，红色的两条路线/边框指出酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示出为CFSE, Treg按仔细观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培养3在此之后顺利完成流式巨噬细胞奥义扫描。(a-d)与CD4+这样的话者来得较应以的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用总和。用到阴性对照(激活着的拥护以巨噬细胞另有treg)量化抑制作用总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

左图5 现像CD4+T巨噬细胞对加速的蓬勃发展的T巨噬细胞再生的抑制作用更想像中端。SP一组用金色的两条路线和边框指出，HD一组用黑色的两条路线和边框指出，红色的两条路线/边框指出酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示出，treg按仔细观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培养3在此之后顺利完成流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬细胞因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中所的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

论点：我们证明了新的论点是，来自加速的蓬勃发展子的再生知觉CD4+Treg在GITR强调中所得到了拓展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1标准型心血管疾病风险性状中所的异质性的必要性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28