Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者方面缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失呼吸道自身抗形体到消失1型号肝炎病理病症的十分困难率在学龄前以前就有很好的所述，多个呼吸道自身抗形体乙型肝炎的学龄前之中有70%在血清反转后10在短期内入院肝炎，而随访15年的学龄前这一比例缩减到84%。相比之下，占多数病理1型号肝炎一半以上的型号1型号肝炎的发作程序还没有得到充分的学术研究。

越来越多的人开始用作分期系统来度量1型号肝炎的十分困难：形态在消失多种呼吸道自身抗形体时进入第1阶段，消失血糖反常时进入第2阶段，消失病症时进入第3阶段。一些多发呼吸道自身抗形体乙型肝炎的形态，在1期和2期，十分困难较比较慢，并工业发展为发作的1型号肝炎。我们以前所述了一一组在首次检测到多种呼吸道自身抗形体检查后至更少10年无肝炎的极比较慢十分困难者，这一组病人人数更少，但构造非常明确。随后，我们辨认出呼吸道自身特异性特异性CD8+T细胞核子自由基在十分困难较快的病人之中基本不存在，但在近期发作和曾一度存在的肝炎病人之中很容易检测到。这可能证明，与十分困难病人相比，这些病人自身免疫自由基的可调增强。

早期学术研究证明，尽管可调性T细胞核子(Treg)数量但会，但肝炎病人存在一些程序缺陷，其之中包括对IL-2的自由基技能减小。此外，肝炎病人之中的不稳定性CD4+T细胞核子可能对可调非常具抵抗性，形体现为不稳定性T细胞核子的抑止减弱，连续性显现出的Treg和形体外显现出的诱发Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞核子之中IL-2自由基减弱。本学术研究的目地是所述了CD4+可调性T细胞核子(Treg)在一小群极较快十分困难者之中的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁表列出确诊的病人亲属之中检查1型号肝炎的小心因素。我们以前所述了曾一度较快十分困难者的构造，他们保证多重呼吸道自身抗形体乙型肝炎超过10年，但没有消失肝炎的病理病症，比较慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名再次保证无肝炎并不愿提供大量血液检查的较快十分困难者不属于T和B细胞核子程序系统性。在现在的学术研究之中，8名比较慢十分困难者(SP一组)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身抗形体乙型肝炎。所有的旁观者都处于1型号肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗形体对某些特异性的乙型肝炎自由基，然而，一名病人已经处于2期至更少6年，但没有消失病理病症，一名病人被诊断为肝炎，该人脑72岁，在采集检查检查时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性之中对该酪氨酸顺利完成了分开审核子。分离外周血单个核子细胞核子(PBMCs)，采用多参数流式细胞核子练成和T细胞核子抑止次测试审核子酪氨酸之中Treg的频谱、表型号和程序。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和回归)顺利完成无监督聚类系统性，审核子Treg表型号。

结果：与健康酪氨酸相比，来自比较慢十分困难形体的遗忘CD4+T细胞核子的监督聚类推测，应答的遗忘CD4+ Treg频谱缩减，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c增高的病人与十分困难较快者和最简单的对照一组相比，Treg谱有所多种不同。程序系统性证明，与健康酪氨酸相比，来自较快十分困难形体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞核子抑止明显破损。形体现为对不稳定性CD4+T细胞核子CD25和CD134传达的抑止缩减。

三幅1 深入的表型号系统性推测，CD4+Treg亚型号在比较慢十分困难表头之中缩减。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞核子上。根据标明物传达鉴定出10个元簇:遗忘T细胞核子_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核子;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核子;支线程Treg_1;支线程Treg_2;支线程Treg_3;和支线程Treg_4。(a)用作9个多种不同Treg标明填充的10个元簇的MST。每个路由代表一个集群(100个集群)，非常大的元集群(10个元集群)在路由一组周围上色。每个路由之中的饼三幅说明单个标明的传达分级。(b)每个元聚类的热三幅，以推测结构上标明传达。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)填充三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对于原子量为每个metacluster装入支线三幅(原子量> 0.05%)确定为HD和SP一组:支线程Treg_2 (e),支线程Treg_3 (f),支线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核子(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核子(l)。橙色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用作CITRUS的预测模型号猜测，Treg频谱的缩减是十分困难较快的标志。分级暂时性(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP旁观者和最简单的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞核子上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利完成分离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(星点)一组以及酪氨酸SP 606(橙色)之中CD25+ cd127的频谱统计三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性邻域的装入支线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(支线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(支线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(支线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+支线程T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，圆点突出的簇被识别为SP和HD表头之间的多种不同。(j)装入支线三幅推测了在SP(星点)和HD(灰点)一组之中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于原子量(比例)。(k)直方三幅推测每个簇的表型号(粉红色)和Treg标明相对于传达与背景传达(蓝色);上列，支线程Treg_3;下面一行，支线程Treg_4。背景与所有其他簇之中标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

三幅3 与健康献血者相比，十分困难较快者遗忘treg的GITR缩减。每个遗忘CD4+T细胞核子元簇(遗忘T细胞核子_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核子;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核子;支线程Treg_2;支线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标明的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的传达热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方三幅(c)和统计三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(橙色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(蓝色)酪氨酸SP 606和最简单的HD不包括在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR传达，从分级暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)串联，推测直方三幅(e)和统计三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

三幅4 来自较快十分困难的CD4+ treg细胞核子高度集中不稳定性CD4+T细胞核子的技能减小。SP一组用蓝色的支线和左上方说明，HD一组用白色的支线和左上方说明，橙色的支线/左上方说明酪氨酸sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核子顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标明为CFSE, Treg按仔细观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞核子，指导3天后顺利完成流式细胞核子练成检测。(a-d)与CD4+这样的话者相对于应的treg指导(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者指导。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。用作乙型肝炎对照(应答的积极响应细胞核子不含treg)测算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 不稳定性CD4+T细胞核子对较快十分困难的T细胞核子再造的抑止非常敏感。SP一组用蓝色的支线和左上方说明，HD一组用白色的支线和左上方说明，橙色的支线/左上方说明酪氨酸sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核子顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标明，treg按仔细观察的比例溶液。用抗CD3 /28微珠再造细胞核子，指导3天后顺利完成流式细胞核子练成(CD25反染)和细胞核子因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同指导。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导之中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较快十分困难子的再造遗忘CD4+Treg在GITR传达之中得到了扩展和丰富，强调了促使学术研究Treg在1型号肝炎风险形态之中的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28