Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中都逐渐扩展

从第一次消失肾脏自身免疫球蛋白到消失1型号心血管疾病病理患者的成果领军在学龄前时期就有很好的详细描述，多个肾脏自身免疫球蛋白乙型肝炎的学龄前之前有70%在胰岛素转成后10周内患上心血管疾病，而随访15年的学龄前这一数量缩减到84%。相比之下之下，占有病理1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的中风特性还没有得到适当的学术研究。

更加多的人开始适用分期系统来度量1型号心血管疾病的成果：个体在消失多种肾脏自身免疫球蛋白时踏入第1之前，消失浓度诱发时踏入第2之前，消失患者时踏入第3之前。一些多发肾脏自身免疫球蛋白乙型肝炎的个体，在1期和2期，成果较慢，并发展为中风的1型号心血管疾病。我们之前详细描述了一第一个大在首次检测到多种肾脏自身免疫球蛋白取样后仅仅10年无心血管疾病的近乎慢成果者，这第一个大患儿人数少，但基本特征相当确实。随后，我们发现肾脏自身抗原选择性CD8+T细胞核质子化在成果很慢的患儿之前整体不发挥作用，但在近期中风和近十年发挥作用的心血管疾病患儿之前很容易检测到。这也许证明，与成果患儿相比之下，这些患儿致病质子化的通气减慢。

早期学术研究证明，尽管通气性T细胞核(Treg)数量正常，但心血管疾病患儿发挥作用一些特性缺陷，其之前包括对IL-2的质子化意志力减小。此外，心血管疾病患儿之前的波动CD4+T细胞核也许对通气更具抵抗性，平庸为波动T细胞核的诱发减弱，自然显现出的Treg和排泄显现出的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核之前IL-2质子化减弱。本学术研究的目的是详细描述了CD4+通气性T细胞核(Treg)在一个大近乎很慢成果者之前的基本特征，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX学术研究是一项以人群系统化的纵向学术研究，在21岁以下复发的患儿亲人之前检查1型号心血管疾病的危险性各种因素。我们之前详细描述了近十年很慢成果者的基本特征，他们保证多重肾脏自身免疫球蛋白乙型肝炎超过10年，但没有消失心血管疾病的病理患者，慢性或非来癫痫致病。随后，10名继续保证无心血管疾病并想要提供大量血液取样的很慢成果者纳入T和B细胞核特性系统性。在以外的学术研究之前，8名慢成果者(SP第一个大)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肾脏自身免疫球蛋白乙型肝炎。所有的参加者都处于1型号心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后丧失了肾脏自身免疫球蛋白对某些抗原的乙型肝炎质子化，然而，一名患儿已经处于2期仅仅6年，但没有消失病理患者，一名患儿被诊疗为心血管疾病，该受试者72岁，在收集实验取样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性之前对该酪氨酸来进行了单独审计。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，换用多模板流式细胞核术和T细胞核诱发试制审计酪氨酸之前Treg的基频、表型号和特性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和紧接)来进行无指派聚类系统性，审计Treg表型号。

结果：与生活品质酪氨酸相比之下，来自慢成果体的知觉CD4+T细胞核的指派聚类推断，触发的知觉CD4+ Treg基频缩减，与糖皮质激素可借的TNFR关的蛋白(GITR)表述缩减有关。一名HbA1c上升时的患儿与成果很慢者和最简单的对照第一个大相比之下，Treg谱有所各不相同。特性系统性证明，与生活品质酪氨酸相比之下，来自很慢成果体的Treg介导的CD4+波动T细胞核诱发明显损毁。平庸为对波动CD4+T细胞核CD25和CD134表述的诱发缩减。

左图1 深入的表型号系统性推断，CD4+Treg亚型号在慢成果描述符之前缩减。由FlowSOM转化的Treg楼内，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标明物表述认定出10个元簇:知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)适用9个各不相同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个终端代表者一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端第一个大周围上色。每个终端之前的饼左图坚称单个标明的表述层次。(b)每个元聚类的热左图，以推断整体标明表述。(c, d)为HD第一个大(c)和SP第一个大(d)转化左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下丰度为每个metacluster箱内线左图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第一个大:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核(l)。紫色圆圈代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 适用CITRUS的预测模型号证实，Treg基频的缩减是成果很慢的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘系统性(g-k)较为SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的特色左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述来进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(外缘)和SP(虎纹)第一个大以及酪氨酸SP 606(紫色)之前CD25+ cd127的基频综合左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型可数的箱内线左图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度著色，箭头突出的簇被识别为SP和HD描述符密切关系的各不相同。(j)箱内线左图推断了在SP(虎纹)和HD(灰点)第一个大之前，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比之下丰度(数量)。(k)直方左图推断每个簇的表型号(粉红色)和Treg标明相比之下表述与故事情节表述(金色);上列，内核Treg_3;下面即刻，内核Treg_4。故事情节与所有其他簇之前标明的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

左图3 与生活品质献血者相比之下，成果很慢者知觉treg的GITR缩减。每个知觉CD4+T细胞核元簇(知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表述热左图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之前所有HD(黄褐色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表述联结，推断直方左图(c)和综合左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(紫色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(金色)酪氨酸SP 606和最简单的HD不包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表述，从分级依赖型，从所有HD(黄褐色)、所有SP(金色)和SP 606(紫色)联结，推断直方左图(e)和综合左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

左图4 来自很慢成果的CD4+ treg细胞核控制波动CD4+T细胞核的意志力减小。SP第一个大用金色的线和圆圈坚称，HD第一个大用黄褐色的线和圆圈坚称，紫色的线/圆圈坚称酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按检视的数量试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞核，培育3天内来进行流式细胞核术检测。(a-d)与CD4+；也者相比之下应的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱发多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发多于。适用乙型肝炎对照(触发的响应细胞核包含treg)量度诱发多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

左图5 波动CD4+T细胞核对很慢成果的T细胞核活化的诱发更恰当。SP第一个大用金色的线和圆圈坚称，HD第一个大用黄褐色的线和圆圈坚称，紫色的线/圆圈坚称酪氨酸sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按检视的数量试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞核，培育3天内来进行流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606；也者携手培育。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱发三份(b)。(c,d) CD25诱发三份(c)和CD134诱发三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之前的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

论断：我们得出的论断是，来自很慢成果子的活化知觉CD4+Treg在GITR表述之前得到了扩展和丰富多彩，强调了进一步学术研究Treg在1型号心血管疾病风险个体之前的系统性的必要性。

来历来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28