Diabetologia：激活但系统受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出胰脏自身抗躯到显现出1型号白血病外科呕吐的实质性百余人在成年人时期就有较好的描绘，多个胰脏自身抗躯白血病的成年人当中有70%在血清转换后10年底患上白血病，而随访15年的成年人这一人口比例上升到84%。相比之下之下，占外科1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的发病机制还并未得到充分的研究。

越来越多的人开始采用应于种系统来定义1型号白血病的实质性：个躯在显现出多种胰脏自身抗躯时转至第1阶段性，显现出血糖异常时转至第2阶段性，显现出呕吐时转至第3阶段性。一些多发胰脏自身抗躯白血病的个躯，在1期和2期，实质性速度更慢，并发展为发病的1型号白血病。我们以后描绘了一分组在首次检测到多种胰脏自身抗躯样品后至再加10年无白血病的极更慢实质性者，这分组病症人数再加，但特征相当确实。随后，我们发现胰脏自身抗体基因表达CD8+T肝细胞重排在实质性快速的病症当中基本不不存在，但在近期发病和长期不存在的白血病病症当中很容易检测到。这可能表明，与实质性病症相比之下，这些病症自身免疫重排的调节减慢。

早期研究表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量正常，但白血病病症不存在一些机能缺陷，其当中包括对IL-2的重排技能下降。此外，白血病病症当中的现像CD4+T肝细胞可能对调节更具抵抗性，发挥为现像T肝细胞的减缓减弱，人为产生的Treg和躯外产生的其会Treg，以及抗体经历的CD4+T肝细胞当中IL-2重排减弱。本研究的借此是描绘了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一小群极快速实质性者当中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX研究是一项以人群为基础的斜向研究，在21岁以下复发的病症亲族当中检查1型号白血病的生命危险因素。我们以后描绘了长期快速实质性者的特征，他们保持多重胰脏自身抗躯白血病超过10年，但并未显现出白血病的外科呕吐，更慢性或非外阴自身免疫。随后，10名继续保持无白血病并愿意共享大量血液样品的快速实质性者纳入T和B肝细胞机能量化。在目前的研究当中，8名更慢实质性者(SP分组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身抗躯白血病。所有的组织者都处于1型号白血病实质性的1期，尽管一些人随后挽回了胰脏自身抗躯对某些抗体的白血病重排，然而，一名病症已经处于2期至再加6年，但并未显现出外科呕吐，一名病症被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集科学实验样品时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据量化当中对该NAD完成了实际上评核。裂解外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞妖术和T肝细胞减缓飞行测试评核NAD当中Treg的频百余人、遗传号和机能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)完成无督导聚类量化，评核Treg遗传号。

结果：与身躯健康NAD相比之下，来自更慢实质性躯的遗忘CD4+T肝细胞的督导聚类推断，激活的遗忘CD4+ Treg频百余人上升，与糖皮质激素其会的TNFR相关蛋白(GITR)强调上升有关。一名HbA1c升温的病症与实质性快速者和最简单的对照分组相比之下，Treg著者有所各不相同。机能量化表明，与身躯健康NAD相比之下，来自快速实质性躯的Treg介导的CD4+现像T肝细胞减缓明显受到破坏。发挥为对现像CD4+T肝细胞CD25和CD134强调的减缓上升。

由此可知1 险恶的遗传号量化推断，CD4+Treg甲型号在更慢实质性队列当中上升。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示物强调鉴定出10个元簇:遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)采用9个各不相同Treg标示填充的10个元簇的MST。每个路由器代表一个坦克部队(100个坦克部队)，很大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器分组周围上色。每个路由器当中的饼由此可知表示单个标示的强调档次。(b)每个元聚类的热由此可知，以推断整躯标示强调。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较金属量为每个metacluster装新3](金属量> 0.05%)确切为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T肝细胞(l)。黄色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 采用CITRUS的预测模型号证实，Treg频百余人的上升是实质性快速的标志。分级门控(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP组织者和最简单的HD组织者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的权威性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调完成裂解，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及NADSP 606(黄色)当中CD25+ cd127的频百余人概要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装新3];(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调切变后处理，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的各不相同。(j)装新3]推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组当中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相比较金属量(人口比例)。(k)直方由此可知推断每个簇的遗传号(粉红色)和Treg标示相比较强调与取材强调(黄色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。取材与所有其他簇当中标示的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

由此可知3 与身躯健康献血者相比之下，实质性快速者遗忘treg的GITR上升。每个遗忘CD4+T肝细胞元簇(遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR强调接在，推断直方由此可知(c)和概要由此可知(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有NAD包括，p< 0.05(黄色)NADSP 606和最简单的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR强调，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)接在，推断直方由此可知(e)和概要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

由此可知4 来自快速实质性的CD4+ treg肝细胞控制现像CD4+T肝细胞的技能下降。SP分组用黄色的新线和红色表示，HD分组用黑色的新线和红色表示，黄色的新线/红色表示NADsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(应答者)被标示为CFSE, Treg按仔细观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，人才3紧接著完成流式肝细胞妖术检测。(a-d)与CD4+应答者相比较应的treg人才(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者人才。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE减缓人口比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓人口比例。采用白血病对照(激活的响应肝细胞则有treg)计算减缓人口比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 现像CD4+T肝细胞对快速实质性的T肝细胞还原的减缓更敏感。SP分组用黄色的新线和红色表示，HD分组用黑色的新线和红色表示，黄色的新线/红色表示NADsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞完成分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标示，treg按仔细观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原肝细胞，人才3紧接著完成流式肝细胞妖术(CD25反染)和肝蛋白酶量化。HD Treg与HD、SP或sp606应答者携手人才。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE减缓次之(b)。(c,d) CD25减缓次之(c)和CD134减缓次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才当中的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们推断的事实是，来自快速实质性子的还原遗忘CD4+Treg在GITR强调当中得到了扩展和丰富，重申了进一步研究Treg在1型号白血病风险个躯当中的异质性的全面性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28